１、概述

巴比妥药物（ｂａｒｂｉｔｕｒａｔｅｓ）属于安眠镇静药物，兽药临床用作镇静剂和化学保定，可引起近似生理性睡眠，主要表现在对中枢神经系统的抑制，量大时对循环系统和呼吸系统也产生抑制作用，服用过量易造成急性死亡，致死期一般多在服药后１０ ｈ左右，长期服用易产生药物积累，导致死亡。许多国家严禁将巴比妥药物用于人类，也禁止其作为饲料添加剂，兽药临床规定了巴比妥药物的休药期，防止动物体内该类药物蓄积浓度过高而影响食用者安全。

巴比妥类药物为巴比妥酸（丙二酰脲）的衍生物，其结构通式见图１。Ｒ１、Ｒ２多为烷基取代基，取代基不同，药物的药理性质有所不同。根据作用时间分为长时（６～８ ｈ）如苯巴比妥；中时（３～６ ｈ）如戊巴比妥；短时（１～３ ｈ）如司可巴比妥；超短时（１０～２０ ｍｉｎ）如硫喷妥（陈新谦２００３）。

２、样本前处理方法

２．１ 样本处理

体液中的巴比妥药物提取方法主要有三种：ＮａＯＨ碱解，ｐＨ１２时使药物转化为钠盐进入水相，水相再调节ｐＨ３．０～３．５，用有机溶剂萃取净化；或β－葡萄糖酸苷酶磷酸缓冲溶液（ｐＨ６．５）于３７℃酶解，使结合的和轭合的药物释放，酶解必须针对药物的种类选择适当的水解酶；或向样本中直接加入磷酸缓冲溶液调ｐＨ，水样直接上ＳＰＥ柱净化。组织样本一般选用甲醇作提取剂，提取方法有匀浆提取法、超声波辅助提取、超临界流体萃取、索氏提取和振荡提取。

２．２样本净化

２．２．１ 柱层析净化、固相萃取技术（ＳＰＥ）

柱层析常用吸附剂为Ｘ－５树脂［１］，是一种新型大孔高分子树脂，具有吸附量大、传质速度快、适用面广的特点；对酸性、中性、碱性药物都有较高的吸附率；样品处理速度快，杂质干扰少，在镇静安眠药物的多残留分析中广泛应用。ＳＰＥ常用反相Ｃ１８柱，如Ｂｏｎｄ Ｅｌｕｔ Ｃｅｒｔｉｆｙ ＳＰＥ柱，常用洗脱剂为正己烷－乙酸己酯（Ｌａｕｒａ Ａ． Ａｄａｍ?熏１９９８）。ＧＤＸ－４０３固相萃取小柱是另一种常用的ＳＰＥ柱（刘翠玲１９９４）。

２．２．２ 固相微萃取技术（ＳＭＰＥ）

ＳＭＰＥ是在一根极细的纤维（如聚丙烯酸酯ＰＡ、聚乙二醇／二乙烯基苯ＣＷ／ＤＶＢ等）上涂上吸附剂做成探针。探针插入液体或处于顶空状态，经过一定的平衡时间，探针吸附一定量的被测组分。将探针插入ＧＣ进样口，在高温下被测组分被分解吸附，直接进行ＧＣ检测。Ｂｒａｄ Ｊ． Ｈａｌｌ［２］ 等使用ＣＷ／ＤＶＢ成功从尿样中提取巴比妥药物，并用ＧＣ－ＭＳ测定，ＬＯＤ为１ ｎｇ／ｍｌ。ＳＭＰＥ与ＬＬＥ相比具有操作简便、提取速度快，减少有机溶剂的用量的优点。与ＳＰＥ相比ＳＰＭＥ可以重复使用，不存在穿漏、堵塞等问题。但ＳＰＭＥ纤维没有选择性，用沉浸法提取样本时，有大量的干扰物质被同时提取，降低了测定的特异性和灵敏度。Ｕ．Ｓｔａｅｒｋ ［３］采用高温ＳＰＭＥ技术克服了这一缺点，在一个密封的小瓶中利用高温（２００℃）将药物提取液加热，使药物挥发以蒸气形式存在，采用顶空技术提取药物，并在ＳＰＭＥ的纤维上涂有衍生化试剂乙酸酐－吡啶，直接进行ＧＣ－ＭＳ分析，司可巴比妥、苯巴比妥在Ｓｃａｎ扫描模式下ＬＯＤ为０．５ μｇ／ｍｌ。

２．２．３ 搅拌棒吸附提取（ＳＢＳＥ）

ＳＢＳＥ是一种新的从水样（如血、尿）中提取富集有机物的样本处理技术，原理是在一个玻璃棒上涂有一层聚二甲基硅氧烷（ＰＤＭＳ）树脂，吸附水样中的有机物。将玻棒与水样以及衍生化试剂一同搅拌一段时间，取出玻棒，吸干水分，用适宜的有机溶剂洗脱靶标分析物，进行分析。对于挥发性或半挥发性的药物，采用热解吸（ＴＤ）技术，使ＳＢＳＥ与ＧＣ－ＭＳ或ＨＰＬＣ－ＭＳ联用进行在线分析。Ｂ．Ｔｉｅｎｐｏｎｔ［４］等首先将ＳＢＳＥ－ＴＤ－ＧＣ－ＭＳ技术在测尿中巴比妥药物时使用，乙酸酐作衍生化试剂，在Ｓｃａｎ模式下ＬＯＤ值为１ μｇ／Ｌ，ＬＯＱ值为５ μｇ／Ｌ。ＳＩＭ模式下ＬＯＤ值为１０ ｎｇ／Ｌ。

２．２．４ 超临界流体萃取（ＳＦＥ）

ＳＦＥ是利用超临界流体（如超临界ＣＯ２）作溶剂提取混合物中可溶性组分的一种前处理技术。具有速度快、效率高、选择性好、应用范围广、无毒不污染环境等优点。利用超临界ＣＯ２作溶剂，萃取温度４５℃，压力５５０ ＭＰａ下，ＧＣ直接测定了动物胃、肝脏中的巴比妥药物，提取率达８９．９８％，整个分析时间为４０ ｍｉｎ（徐远清２００２）。

３ 测定方法

３.1气相色谱（GC）法

巴比妥药物极性较弱，熔点低，加热易挥发，可用气相色谱检测。巴比妥药物含有氮元素，ＮＰＤ 和ＦＩＤ［５］均能检测，ＮＰＤ的灵敏度较高，ＬＯＤ值在１０～１００ ｎｇ／ｍｌ；ＦＩＤ的ＬＯＤ值为１０～４００ ｎｇ／ｍｌ。ＧＣ在安眠镇静药物的多类别多残留分析中发挥了重要作用，同时分离分析药物达２６种之多（霍秀敏１９９４）。

３.2 气相色谱-质谱（GC-MS）法

ＭＳ作为ＧＣ检测器可以同时完成对巴比妥药物的定性确证和定量分析。测巴比妥药物，质谱的电离方式有化学电离源（ＣＩ）或电子轰击源（ＥＩ），内标法定量ＬＯＤ值一般１０ ｎｇ／ｍｌ。巴比妥、戊巴比妥和异戊巴比妥的质谱图很类似，需要用色谱保留时间进行区分。硫喷妥等药物在ＧＣ分离时发生分解，分解产物产生与巴比妥相同的质谱图，需要ＧＣ与ＧＣ－ＭＳ综合分析确定药物成分。

巴比妥药物净化后可直接用ＧＣ测定。但巴比妥药物的丙二酰脲环结构氮上有二个氢，采用衍生化技术可减小药物的极性，提高灵敏度和分离效果，得到更好的峰形，提高定性定量的准确性。巴比妥药物的检测限为１０～３０ ｎｇ／ｍｌ，甲基化后降低为０．１～１０ ｎｇ／ｍｌ，常用的衍生化方法有甲基化、酰基化和硅烷基化。

甲基化：巴比妥药物甲基化后得到１３－二甲基巴比妥药物。常用的甲基化试剂是ＣＨ３Ｉ，丙酮介质中加入Ｋ２ＣＯ３和ＣＨ３Ｉ，６０℃下衍生１ ｈ。或氢氧化四甲铵（ＴＭＡＨ），在ＤＭＳＯ介质中静止反应２ ｍｉｎ，ＴＭＡＨ又称瞬时甲基化试剂（Ｕｌｌａ－Ｍａｌｊａ１９９４）。

乙酰化：巴比妥药物的环结构氮上的活泼氢可被乙酰化。在吡啶存在下，与乙酸酐在７０℃反应５ ｍｉｎ即可［３］；或在Ｋ２ＣＯ３ 存在下，与乙酸酐常温下静止２０ ｍｉｎ［４］；或在乙醇：吡啶（２：１Ｖ／Ｖ）条件下，与三氯乙酸（ＥＣＦ）混匀，超声１５ ｍｉｎ。

硅烷基化：巴比妥药物的二酰脲结构中有可烯醇化的酮基（邻位氮原子有氢原子），易形成硅烷烯醇醚衍生物。硅烷基化试剂为ＢＳＴＦＡ和ＴＭＳ，在吡啶介质中，静止１０ ｍｉｎ即可吹干进行ＧＣ分析（Ｐｏｃｃｉ－Ｒ．１９９２）。ＭＳＴＦＡ ［３］是另一种常用的硅烷基化试剂。

高灵敏度是残留分析追求的永远主题。 Ｍ． Ｗ． Ｊ ｖａｎ Ｈｏｕｔ［６］首先将大体积进样技术（ＬＶＴｓ）和程序升温汽化技术（ＰＴＶ）用于巴比妥类药物的残留分析，进样量为５０～１００ μｌ，建立了血中苯巴比妥、司可巴比妥等的ＧＣ－ＭＳ、ＧＣ－ＦＩＤ检测方法，其中ＧＣ－ＦＩＤ的ＬＯＤ值为５～１０ ｎｇ／ｍｌ，ＧＣ－ＭＳ的ＬＯＤ值为２５０ ｐｇ／ｍｌ。与一般的分流／不分流进样（１ μｌ）相比灵敏度提高了５０倍。

３.3高效液相色谱（HPLC）

巴比妥的ＨＰＬＣ测定方法可在水相中进行，样品不需衍生处理。采用反相ＨＰＬＣ测定，测定常用的色谱柱是Ｃ１８柱 ［７］，检测器为紫外检测器（ＵＶ），检测波长为２５４ ｎｍ，一般以磷酸盐缓冲溶液（ＰＨ３．５～７．８）－乙腈或甲醇－水作流动相，内标法定量ＬＯＤ最低可达０．３５ μｇ／ｍｌ。二极管阵列检测器（ＤＡＤ）和电化学检测器（Ｍａｒｔｉｎ Ｄ． Ｒｏｓｅ１９９２）的检测限较ＵＶ检测器低。

３.4高效液相色谱-质谱（HPLC-MS）法

巴比妥药物的ＨＰＬＣ－ＭＳ测定多采用电喷雾电离ＥＳＩ和大气压化学电离ＡＰＣＩ，ＬＯＤ值在２０ ｎｇ／ｍｌ左右。Ｔｉｍｏｔｈｙ Ｗ． Ｒｙａｎ［８］利用粒子束接口技术，ＥＩ／ＣＩ电离方式分析了１２种巴比妥药物，并用ＥＩ谱库检索，确证了药物结构，证明用ＨＰＬＣ－ＭＳ对巴比妥可以较好的定性。Ｈｉｄｅｋｏ［９］用磷酸盐缓冲溶液－乙腈作流动相，利用柱分离技术在样本进入ＭＳ前除去磷酸盐缓冲溶液，提高分离效率，同时检测苯二氮卓、巴比妥、吩噻嗪三类镇静药物。

胶束电动毛细管电泳、胶束液相色谱、高效毛细管电泳、酶联免疫以及光度法在巴比妥药物的残留分析中均有报道，但尚处于发展阶段。

４ 问题与展望

对巴比妥药物残留检测分析方法的研究，可以监测动物饲料、动物疾病治疗等滥用药物的情况，保障食用者的安全。但在以下几个方面还需加大研究力度：第一，动物食品及组织中巴比妥药物的检测和复杂的前处理技术研究；第二，动物食品中巴比妥药物的检测研究，（动物食品中巴比妥药物的检测还没有象其他药物如氯霉素、瘦肉精一样形成具体的标准方法）；第三，巴比妥药物的筛选和代谢产物的残留检测研究