摘　要：为了观察盐酸多西环素对急性期犬埃立克体病的治疗效果，对人工感染埃立克体的比格犬进行了盐酸多西环素的治疗试验。采集比格犬感染前及治疗前后的血液样本，测定血常规及各项血生化指标，并对测定结果作统计学处理。血常规检测发现与治疗前相比，治疗后RBC、WBC、HGB、PLT、MPV、NEUTRO、LYM、MONO和RDW显著升高；HCT、MCV、MCH和MCHC无明显变化；血生化检测发现，与治疗前相比，治疗后ALT和AST显著降低，ALB显著升高；治疗后与感染前相比，血常规和血生化各项均没有显著变化。进一步证实了盐酸多西环素对犬埃立克体病急性期病例具有良好的治疗效果。

关键词：埃立克体病；盐酸多西环素；血常规；血生化指标；比格犬

犬埃立克体病(Canine ehrlichiosis)是由严格细胞内(白细胞或血小板)寄生的革兰氏阴性球杆菌——埃立克体(Ehrlichia，属立克次体科)所致的以热带、亚热带为主的全球分布的人兽共患传染性疾病[1]。由于埃立克体感染可以引起犬的各类血细胞的减少，犬埃立克体病也被称为犬泛血细胞减少症[2­3]。

我国发现的犬埃立克体病均为犬埃立克体(E.canis)和扁平埃立克体(E.platy)的混合感染，犬埃立克体和扁平埃立克体是引起我国埃立克体病的病原体[4­6]。本研究用犬埃立克体病病犬血白细胞和血小板感染比格犬，建立了犬埃立克体病的实验模型，对比格犬进行了盐酸多西环素的治疗试验，并对其血常规及血生化指标进行了检测和分析。

1　材料与方法

1.1　试验用动物

3月龄～6月龄比格犬6只，来自南方医科大学实验动物中心，普通级，雌雄各半。感染前测体温，并进行血常规检查，同时采集血样经埃立克体属特异性引物进行2次PCR检测，各项指标均无异常。

1.2　动物接种

保存于－80 ℃的病犬血白细胞(已感染犬埃立克体Gzh982株)及血小板(已感染血小板埃立克体Gzh981株)解冻后，用生理盐水调整细胞浓度为106个/mL，按5 mL/只静脉注射比格犬。

1.3　治疗方案

试验中的6只比格犬分2组，即用药组4只和对照组2只。用药组都于发热后第5天开始，采用盐酸多西环素口服治疗。每次按20 mg/kg体重投服盐酸多西环素，每天1次，连续服药10 d；对照组不采取任何治疗措施。

1.4　血样采集

感染前第1、7、14天采血3次，感染后第2、8、15天采血3次，治疗结束后第10、20、30天采血3次。清晨空腹由前肢头静脉采血6 mL，其中2 mL用于血常规检测，4 mL用于各项生化指标的检测。

1.5　样品检测

1.5.1　血常规　包括红细胞数(RBC)、白细胞数(WBC)、血红蛋白(HGB)、血细胞压积(HCT)、红细胞平均体积(MCV)、红细胞平均血红蛋白含量(MCH)、红细胞平均血红蛋白浓度(MCHC)、血小板数(PLT)、血小板体积(MPV)、红细胞体积平均分布密度(RDW)、淋巴细胞数(LYM)、中性粒细胞数(NEUTRO)、单核细胞数(MONO)，以项目上均采用瑞典AC­900＋全自动血球计数仪进行检测。

1.5.2　血生化检测　用美国NET­AGII全自动生化分析仪检测丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、尿酸(UA)、碱性磷酸酶(ALP)、尿素氮(BUN)、白蛋白(ALB)和总蛋白(TP)等血液生化指标。

1.5.3　统计分析　利用SPSS10.0软件进行统计分析，具体方法选用随机化配对设计资料均数的t检验，并比较治疗前后以及感染前和治疗后血常规、血生化值中各项参考值的变化。

2　结果

2.1　血常规的变化

2.1.1　治疗前后血常规的变化　治疗后血液常规值显著升高的项目有RBC、WBC、HGB、PLT、MPV、NEUTRO、LYM、MONO和RDW(P＜0.05＝；HCT、MCV、MCH和MCHC无明显变化(表1)。

表1　比格犬埃立克体病治疗后血液生理变化

Table 1　Changes of blood routine after treatment with Doxycycline Hyclate

项目

Item

发病后

Post­onset

治疗后

Post­treatment

差值

Difference

t值

t value

P值

Pvalue

RBC/(10¹²·L^－1)

6.89±0.26

6.02±0.09

0.868

7.070

0.006

WBC/(10⁹·L^－1)

6.68±1.30

10.39±0.83

3.718

14.877

0.001

HGB/(g·L^－1)

143.68±20.67

176.72±15.46

33.045

8.730

0.003

HCT/℅

37.33±3.87

50.86±6.03

13.535

2.778

0.069

MCV/fL

73.76±3.76

74.30±4.92

0.525

0.490

0.658

MCH/pg

24.68±1.25

25.02±1.68

0.348

1.427

0.249

MCHC/(g·L^－1)

303.89±49.69

335.23±19.13

31.345

1.216

0.311

PLT/(10⁹·L^－1)

24.32±10.61

286.80±56.49

262.485

8.203

0.004

MPV/fL

17.51±3.45

9.04±0.66

8.468

4.467

0.021

RDW/℅

16.54±0.46

17.13±0.53

0.585

11.839

0.001

LYM/(10⁹·L^－1)

0.50±0.13

2.14±0.37

1.635

13.368

0.001

NEUTRO/(10⁹·L^－1)

7.56±0.98

8.23±1.12

0.665

3.313

0.227

MONO/(10⁹·L^－1)

0.26±0.07

1.48±0.17

1.248

24.436

0.000

2.1.2　治疗后与感染前血常规的变化　治疗后与感染前相比较， RBC、WBC、HGB、HCT、PLT、MPV、LYM、MONO、RDW、MCV、MCH、MCHC和NEUTRO都恢复到了正常水平(表2)。

表2　比格犬感染埃立克体前和治疗后血液学变化

Table 2　Comparison of changes of blood routine before infection and after treatment with Doxycycline Hyclate

项目

Items

感染前

Pre­infection

治疗后

Post­treatment

差值

Difference

t值

t value

P值

Pvalue

RBC/(10¹²·L^－1)

6.96±0.23

6.89±0.26

9.500

1.884

0.156

WBC/(10⁹·L^－1)

11.15±1.21

10.39±0.83

0.760

2.208

0.114

HGB/(g·L^－1)

179.65±12.04

176.72±15.46

2.930

0.979

0.400

HCT/℅

53.85±3.33

50.86±6.03

2.990

1.118

0.345

MCV/fL

74.18±4.46

74.30±4.92

0.125

0.260

0.812

MCH/pg

25.03±1.32

25.02±1.68

0.025

0.011

0.992

MCHC/(g·L^－1)

340.26±10.31

335.23±19.13

5.030

0.991

0.395

PLT/(10⁹·L^－1)

354.43±32.22

286.80±56.49

12.630

2.991

0.025

MPV/fL

8.84±0.46

9.04±0.66

0.208

1.019

0.383

RDW/℅

17.05±0.69

17.13±0.53

0.075

0.527

0.635

LYM/(10⁹·L^－1)

2.16±0.68

2.14±0.37

0.028

0.147

0.892

NEUTRO/(10⁹·L^－1)

7.67±0.94

8.23±1.12

0.043

0.634

0.086

MONO/(10⁹·L^－1)

1.54±0.07

1.48±0.17

0.055

1.166

0.328

2.2　血生化的变化

2.2.1　治疗前后血生化的变化　由表3可以看出，治疗后ALT和AST显著降低(P＜0.05)，ALB显著升高(P＜0.05)。

表3　比格犬感染埃立克体病治疗后血液生化值变化

Table 3　Changes of blood chemistry after treatment with Doxycycline Hyclate

项目

Items

发病后

Post­infection

治疗后

Post­treatment

差值

Difference

t值

t value

P值

Pvalue

ALT/(U·L^－1)

46.20±4.92

31.30±4.55

14.903

6.329

0.008^*

AST/(U·L^－1)

25.80±5.42

31.36±5.36

5.560

3.568

0.038^*

BUN/(μ mol·L^－1)

4.04±0.53

4.02±0.55

0.020

1.633

0.201

UA/(μ mol·L^－1)

10.22±2.07

9.82±3.12

0.403

0.716

0.526

CR/(μ mol·L^－1)

74.40±8.07

74.73±6.08

0.333

0.183

0.867

ALP/(U·L^－1)

179.27±28.32

182.93±12.57

3.655

0.440

0.689

ALB/(g·L^－1)

21.68±2.15

27.05±1.03

5.368

4.749

0.018^*

TP/(g·L^－1)

65.65±6.05

66.67±5.28

1.023

0.594

0.595

注：“*”表示差异显著，P<0.05。

Note：“*” show significant difference，P<0.05.

2.2.2　治疗后与感染前血生化的变化　由表4可以看出，治疗后与感染前相比较， ALT和AST均降低至正常水平，ALB也上升到正常水平。

表4　比格犬感染埃立克体病前和治疗后血液生化值变化

Table 4　Changes of blood chemistry after treatment with Doxycycline Hyclate

项目

Items

感染前

Before­infection

治疗后

Post­treatment

差值

Difference

t值

t value

P值

Pvalue

ALT/(U·L^－1)

30.52±4.60

31.30±4.55

0.783

0.903

0.433

AST/(U·L^－1)

25.78±5.35

25.80±5.42

0.020

0.066

0.951

BUN/(μ mol·L^－1)

4.26±0.56

4.04±0.53

0.015

0.196

0.857

UA/(μ mol·L^－1)

10.11±2.52

9.82±3.12

0.288

0.822

0.471

CR/(μ mol·L^－1)

75.40±9.05

74.73±6.08

0.668

0.361

0.742

ALP/(U·L^－1)

186.05±14.23

182.93±12.57

3.123

0.935

0.419

ALB/(g·L^－1)

27.96±0.43

27.06±1.03

0.890

1.916

0.151

TP/(g·L^－1)

66.13±6.73

66.67±5.28

0.543

0.350

0.750

3　讨论

本试验采用的6只比格犬均为健康良好，埃立克体PCR检测阴性的正常犬，采血部位为前肢头静脉，且为清晨空腹采血，采血后及时处理样品，所有仪器均为自动分析仪和试剂盒，以确保结果的可靠性、均一性。

试验以建立的比格犬埃立克体病实验模型，用盐酸多西环素进行疗效试验，不仅使RBC、WBC、HGB、HCT、PLT、MPV、LYM、MONO、RDW和ALB升高，ALT和AST降低，而且实验用犬的各项血液生理生化指标均恢复到正常水平。此结果表明，用四环素类药物治疗急性期犬埃立克体病的病犬的效果是确切的，每天按20 mg/kg体重投服盐酸多西环素连续10 d可以治愈急性感染期的埃立克体病犬。

Mylonakis M E等[7]研究表明用盐酸多西环素治疗慢性期的埃立克体病病犬没有疗效或预后不佳，慢性期的病犬病死率较高还经常成为了埃立克体病的传染源。因此发现犬出现不明原因的体温升高、出血，并有蜱接触史，而又不具备实验室检查、确诊的情况下，可采用盐酸多西环素进行诊断性治疗和预防，以防止病犬转入慢性阶段。