摘　要：为建立检测可疑病料中猪胸膜肺炎放线杆菌(App)的方法，针对App的RTX毒素(Apx ⅣA毒素)毒力基因长约449 bp的片段设计引物，以App 10个血清型的基因组分别作为模板，对PCR扩增条件进行优化筛选，并进行了特异性及重复性试验。对副猪嗜血杆菌、马链球菌兽疫亚种、多杀性巴氏杆菌的扩增结果为阴性，表明该PCR方法特异性强，建立了该菌的种属特异性PCR方法。以筛选出的优化条件，对22份临床可疑病料进行了检测。结果表明，建立的PCR方法特异、快速、稳定、敏感，优于传统的细菌学方法，可作为App可疑病料的检测方法。

关键词：胸膜肺炎放线杆菌；多聚酶链反应；特异性；检测

胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae，App)，原称胸膜肺炎嗜血杆菌(Haemophilus pleuropneumoniae，Hpp)，属于巴氏杆菌科嗜血杆菌属，后又根据其表型(phenotype)和DNA杂交水平均与放线杆菌属模式种密切相关，又归属于巴氏杆菌科放线杆菌属，命名为猪胸膜肺炎放线杆菌[1]。由本菌引起的猪传染性胸膜肺炎是猪的呼吸道传染病，各种年龄的猪均易感染，常与巴氏杆菌等混合感染[2]。病猪发热可达42 ℃，呼吸困难，食欲不振；剖检可见纤维素性胸膜肺炎，多呈两侧感染，65%的肺叶病变严重；发病率8.5%～100%，病死率0.4%～100%[3]；App还可引起仔猪后躯麻痹[4]。本病几乎遍及全世界所有养猪国家，流行日趋严重，成为世界性规模化养猪的重要疫病之一。本病在我国自1987年报道以来，广泛流行，且呈逐年上升趋势。

近年来，在血清学检测方面，国内外已设计了多种检测方法。猪传染性胸膜肺炎的诊断非常困难，传统上主要依赖病原分离和血清学检测，但由于App要求营养条件严格，不易分离培养，且难以与副猪嗜血杆菌、马链球菌兽疫亚种、多杀性巴氏杆菌等相区别；加之临床上大量使用抗生素，导致App的临床分离率很低。而App血清型复杂[5]，仅依据血清学结果又不能对临床病例直接做出确诊。因此，临床诊断工作中迫切需要建立一种灵敏高、特异强、快速的App检测方法。近年发现App的Apx ⅣA毒素具有致病性及种属特异性，存在于App所有血清型中，放线杆菌其他种属、嗜血杆菌和多杀性巴氏杆菌等均无此毒素[6]。为此，本研究采用PCR方法扩增了Apx ⅣA基因的部分片段，以建立一种检测临床病料中App的诊断方法。

1　材料与方法

1.1　标准菌株和病料

App1～App10型标准菌株、多杀性巴氏杆菌C48