NY/T 765-2004
发布2004-02-17 2004-02-17实施
中华人民共和国农业部 发布
前 言
本规范中附录A、附录B均为规范性附录。
本规范由中华人民共和国农业部提出。
本规范由全国动物检疫标准化技术委员会归口。
本规范起草单位：农业部动物及动物产品卫生质量监督检验测试中心、农业部兽医诊断中心。
本规范主要起草人：王玉东、郭福生、龚振华、王宏伟、曲志娜、王娟、刘俊辉、蒋正军。
高致病性禽流感 样品采集、保存及运输技术规范
1 范围
本标准规定了高致病性禽流感病料采集、保存和运输的方法。
本标准适用于疑似高致病性禽流感禽样品的采集、保存及运输。
2 规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单位（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究可以使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
NY/T 768 高致病性禽流感 人员防护技术规范
3 采样前的准备
3． 1 采样要求
3． 1 ．1 根据采样目的，采集不同类型和不同数量的样品。
3． 1 ．2 采样人员必须是兽医技术人员，熟悉采样器具的使用，掌握正确采样方法。
3． 2 器具和试剂
3． 2 ．1 器具
3．2．1．1 动物检疫器械箱，保温箱或保温瓶，解剖刀，剪刀，镊子，酒精灯，酒精棉，碘酒棉，注射器及针头。
3．2．1．2样品容器（如西林瓶，平皿， 1.5mL 塑料离心管， 10mL 玻璃离心管及易封口样品袋，塑料包装袋等）。
3．3．1．3试管架，塑料盒（ 1.5mL 小塑料离心管专用），铝饭盒，瓶塞，无菌棉拭子，胶布，封口膜，封条,冰袋。
3．3．1．4采样刀剪等器具和样品容器须经无菌处理。
3．2．2 试剂
加有抗生素的pH7.4等渗磷酸盐缓冲液（ PBS ）（配制方法见附录A）。
3． 3 记录和防护材料
不干胶标签、签字笔、圆珠笔、记号笔、采样单、记录本等；口罩、一次性手套、乳胶手套、防护服、防护帽、胶靴等。
4．样品采集
4． 1 基本要求
应从死禽和处于急性发病期的病禽采集样品，样品要具有典型性。采样过程要注意无菌操作，同时避免污染环境。采样人员要按NY/T 768要求加强个人防护。
4． 2 病死禽
4． 2 ．1 应采集组织样品。取死亡不久的 5 只病死禽采样，病死禽数不足5只时，取发病禽补齐 5 只。
4． 2 ．2 每只禽采集肠管及肠内容物 1 份；肺和气管样品 1 份；肝、脾、肾、脑等各 1 份并分别采集。上述每个样品取样重量为 15g~20g，放于样品袋或平皿中，如果重量不够可取全部脏器（如脾脏）。
4． 2 ．3 不同禽只脏器不能混样，同一禽只不同脏器不应混样。样品采集完后将样品封口，贴好标签。
4． 3 病禽
4． 3 ． 1 拭子样品
取 5 只病禽采样，每只采集泄殖腔拭子和喉气管拭子各 1 个，将样品端剪下分别置于含有抗生素 PBS 的（加 1.0mL~1.3mLPBS）小塑料离心管中，封好口，贴好标签。
4．3．1．1 泄殖腔拭子采集方法
将棉拭子插入泄殖腔约 1.5~2cm,旋转后沾上粪便。
4．3．1．2 粪便样品
小珍禽采泄殖腔拭子容易造成伤害，可只采集 5 个新鲜粪便样品（每个样品 1 g~2 g ），置于内含有抗生素 PBS （加 1mL~1.5mLPBS）的西林瓶中，封好口，贴好标签。保存粪便和泄殖腔拭子的 PBS 中抗生素浓度提高 5 倍（配制方法见附录A）。
4．3．1. 3 喉气管拭子采集方法
将棉拭子插入口腔至咽的后部直达喉气管，轻轻擦拭并慢慢旋转，沾上气管分泌物。保存喉气管拭子的 PBS 中抗生素浓度（配制方法见附录A）。
4． 3．2 血清样品
采集 10 只病禽的血样，心脏或翅静脉采血，每只病禽采血样 2 mL ~3mL，盛于西林瓶中或 10mL 离心管中，经离心或自然放置析出血清后，将血清移到另外的西林瓶或小塑料离心管中，盖紧瓶塞，封好口，贴好标签。不同禽只的血样不能混合。
4． 3 ．3 组织样品
当需要采集组织样品时，将 5 只病禽宰杀，组织样品采样方法同 4.2 。
4． 4 整禽采样
4． 4 ．1 适于禽主或兽医部门采样。
4． 4 ．2 将病死禽或病禽装入塑料袋内，至少用两层塑料袋包装，同时和血清样品一起用保温箱加冰袋密封包装，由采样人员 12h内带回或送到实验室。
4． 4 ． 3 要求死禽和病禽总数不少于 5 只；组织采样方法同4.2。
4． 4 ． 4 血清样品不少于 10 份，每份不少于 1.5mL 。采血方法同 4.3.2。
4． 5 采样单及标签等的填写
样品信息详见附录 B，采样单应用钢笔或签字笔逐项填写（一式三份），样品标签和封条应用圆珠笔填写，保温容器外封条应用钢笔或签字笔填写，小塑料离心管上可用记号笔作标记。应将采样单和病史资料装在塑料包装袋中，随样品一起送到实验室。
4． 6 包装要求
4．6．1每个组织样品应仔细分别包装，在样品袋或平皿外面贴上标签，标签注明样品名、样品编号、采样日期等。再将各个样品放到塑料包装袋中。
4．6．2拭子样品小塑料离心管应放在特定的塑料盒内。
4．6．3血清样品装于西林瓶时应用铝盒盛放，盒内加填塞物避免小瓶晃动，若装于小塑料离心管中，则应置于塑料盒内。
4．6．4包装袋外、塑料盒及铝盒应贴封条，封条上应有采样人签章，并注明贴封日期，标注放置方向，切勿倒置。
5 保存和运输
5． 1 样品应置于保温容器中运输，保温容器应密封，防止渗漏。一般使用保温箱或保温瓶，保温容器外贴封条，封条有贴封人（单位）签字（盖章），并注明贴封日期。
5． 2 样品应在特定的温度下运输,拭子样品和组织样品应作暂时的冷藏或冷冻处理，然后立即运送实验室。
5． 2 ．1 若能在4h内送到实验室，可用冰袋冷藏运输。
5． 2 ．2 如果超过4h，应作冷冻处理，先将样品置于-30 ℃冻结，然后再在保温箱内加冰袋运输，经冻结的样品必须在24h内送到。
5． 2 ．3 若 24h不能送到实验室，则运输过程中环境温度应保持在-20 ℃以下。
5． 3 血清样品要单独存放。若 24h内运达实验室，在保温箱内加冰袋冷藏运输；若超过 24h，要先冷冻后，在保温箱内加大量冰袋运输，途中不能超过 48h。
5． 4 各种样品到达实验室后，若暂时不进行处理，则应冷冻（以-70 ℃或以下为宜）保存，不应反复冻融。
附录A
（规范性附录）
pH7.4 的等渗磷酸盐缓冲液（ PBS ）的配制
A1 pH7.4 的等渗磷酸盐缓冲液（0.01mol/L，pH7.4,PBS）：
NaCI 8.0g
KH2PO4 0.2g
Na2HPO4?12H2O 2.9g
KCI 0.2g
将上列试剂按次序加入定量容器中，加适量蒸馏水溶解后，再定容至1000mL，调pH值至7.4, 高压消毒灭菌112Kpa20min，冷却后，保存于4℃冰箱中备用。
A2 棉拭子用抗生素PBS（病毒保存液）的配制：
取上述PBS液，按要求加入下列抗生素：喉气管拭子用PBS液中加入青霉素（2 000IU/mL）、链霉素（2mg/mL）、丁胺卡那霉素（1 000IU/mL）、制霉菌素（1 000IU/mL）。粪便和泄殖腔拭子所用的PBS中抗生素浓度应提高5倍。加入抗生素后应调pH值至7.4。在采样前分装小塑料离心管，每管中加这种PBS1.0~1.3mL，采粪便时在西林瓶中加PBS1~1.5mL,采样前冷冻保存。
附 录 B
(规范性附录)
禽流感监测采样单
场名或禽主 禽别（划√） □祖代□父母代□商品代
通讯地址
邮编
联系人
电话 传真
栋 号 样品名称 品种 日龄 存养量 采样数量 编号起止
既往病史及免疫情况
临床症状和病理变化
采样单位
联系电话
被采样单位盖章或签名
年 月 日
采样单位盖章或签名
年 月 日
注：
此单一式三份，第一联采样单位保存，第二联随样品，第三联由被采样单位保存。
“编号起止”统一用阿拉伯数字1、2、3、…表示，各场保存原禽只编号。
京公网安备 11010202007233号
