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两种消毒剂对禽流感病毒的杀灭效果

时间：2009-12-18 13:17:52来源：作者：大山

禽流感是由正粘病毒科中的A型流感病毒引起的一种禽类感染和疾病综合征。A型流感病毒基因易变、亚型众多、分布广泛，虽然中国出现的禽流感主要是低致病性的H9N2亚型，但各种家禽散养和混养的生态以及香港和世界各地不断从活禽市场检出H5N1流感病毒或发生禽流感等情况提示我们加强禽流感的防止工作迫在眉睫，除应用疫苗外，卫生和消毒等是非常重要的生物安全措施。我们对两种不同制剂的消毒剂进行了杀灭流感病毒试验，可以给实际应用提供参考。

1 材料与方法

1.1 两种消毒剂均由湖南省浏阳市康利动物保健品厂提供，分别是：菌毒杀星(戊二醛制剂)，批号为20030612；杀毒威(二氯异氰尿酸制剂)，批号为20030611。

1.2 禽流感病毒毒株为A/Chicken/Shanghia/F/98(H9N2)，扬州大学畜禽传染病学实验室分离和保种，由国家流感中心鉴定为H9N2亚型。试验前复苏，测定其鸡胚半数感染剂量(EID50)为10^-11/0.2 ml。

1.3 鸡胚 10日龄非免疫鸡胚，由扬州大学实验动物室提供。

1.4 中和剂对菌毒杀星，选用0.3%亚硫酸钠生理盐水溶液；对杀毒威，选用0.3%硫代硫酸钠生理盐水溶液。

1.5 消毒药对病毒的杀灭率试验在预备试验的基础上，先把消毒剂稀释至不同浓度，菌毒杀星采用1∶2 000、1∶3 000、1∶4 000、1∶5 000、1∶6 000、1∶7 000、1∶8 000和1∶10 000；杀毒威采用1∶3 000、1∶4 000、1∶6 000、1∶8 000、1∶10 000、1∶15 000和1∶20 000。进行KleinDefors悬浮杀灭试验，取1∶10的AIV尿囊液分别与不同稀释度的消毒剂以1∶9混合，在25℃条件下作用5 min或10 min后，取反应液与中和剂以1∶9混合，在25℃作用10 min后用灭菌生理盐水作10倍递进稀释。对照组用灭菌生理盐水代替消毒液，同法处理。将各组和对照组稀释液分别接种10日龄鸡胚尿囊腔，每个稀释度接种4个鸡胚，每胚0.2 ml，37℃培养。24 h内死胚去掉。24 h以后的死胚及时取出，逐个取尿囊液做血凝(HA)试验，直到84 h全部取出逐个做血凝试验。血凝试验阳性(HA价1∶16以上)者判为鸡胚感染。

1.6 结果计算按下列公式计算试验组和对照组鸡胚感染的阳性率、各稀释组下的样品含EID₅₀量及病毒杀灭率。阳性率＝感染鸡胚数/有效鸡胚数样品含EID₅₀量的对数＝L-d(S-0.5)L为最低稀释度的对数；d为稀释度间差的对数；S为消毒药各组稀释度下阳性率之和。

病毒杀灭率(%)＝对照样品含EID₅₀量-试验样品含EID₅₀的量对照样品含EID₅₀量×100

2 结果表中为两种消毒剂在不同稀释度下与禽流感病毒作用5 min或10 min表现的99.9%～100%(合格范围)的杀灭率。见表1。

3 结论

菌毒杀星在1∶2 000至1∶8 000的浓度范围内与AIV作用5 min或10 min，对AIV的杀灭率可达到99.99%以上，稀释度在1∶3 000以下作用5 min或1∶5 000以下作用10 min，杀灭率均为100%。〖JP1〗杀毒威在1∶3 000至1∶20 000的浓度范围内与AIV作用5 min或10 min，对AIV的杀灭率可达到99.9%以上，稀释度在1∶6 000以下作用5 min或1∶8 000以下作用10 min，杀灭率均为100%。

表1 两种消毒剂对禽流感病毒的杀灭率

浓度菌毒杀星杀毒威

5 min 10 min 5min 10 min

1∶2 000 100.00 100.00 NT NT

1∶3 000 100.00 100.00 100.00 100.00

1∶4 000 99.99 100.00 100.00 100.00

1∶5 000 99.98 100.00 NT NT

1∶6 000 99.96 99.99 100.00 100.00

1∶7 000 99.93 99.98 NT NT

1∶8 000 99.91 99.95 99.98 100.00

1∶10 000 99.60 99.76 99.96 99.99

1∶15 000 NT NT 99.93 99.97

1∶20 000 NT NT 99.90 99.94

注：NT为未试验项



试验是在一定条件下(如病毒与消毒剂得到充分混匀)进行的，试验中病毒的含量、与消毒剂的作用时间以及它对鸡胚的感染性都会影响结果。本实验中选用了对鸡胚高度感染的毒株(EID₅₀为10^-11/0.2 ml)，能很好地反映消毒剂的作用效果。实际使用时应具体情况具体分析，以确定合适的稀释度并达到最佳效果。消毒对象和消毒时机，消毒对象表面干净程度、有机物的存在、温度、pH值和消毒剂的穿透能力、消毒剂产品的品质等都是需要考虑的影响因素。因囊膜表面血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)抗原结构的不同，AIV可分为不同的亚型，就消毒作用而言，AIV属于亲脂性病毒，对消毒剂感受性强，不同制剂的消毒剂通过不同的有效成分(如戊二醛和有效氯)非特异性地使病毒囊膜内外的蛋白和酶类发生变性，从而杀灭AIV。在本实验中，虽然根据选择毒株的原则采用了H9N2亚型的毒株，但依据消毒机理，这两种消毒剂对其他亚型AIV的消毒作用可以参考本实验的结果。